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Elisa實(shí)驗(yàn):稀釋標(biāo)準(zhǔn)品實(shí)驗(yàn)步驟
以下是ELISA實(shí)驗(yàn)中標(biāo)準(zhǔn)品稀釋的詳細(xì)步驟總結(jié),綜合多個(gè)實(shí)驗(yàn)操作視頻的關(guān)鍵步驟:
一、標(biāo)準(zhǔn)品稀釋前準(zhǔn)備?
試劑與耗材?
7支空白EP管(編號(hào)S0-S6)
標(biāo)準(zhǔn)品樣本稀釋液(如1x PBS或說明書指定緩沖液) 本生試劑盒
渦旋振蕩器、移液器(建議10-100μL和100-1000μL規(guī)格)
標(biāo)準(zhǔn)品活化?
凍干標(biāo)準(zhǔn)品需先離心1-2分鐘使粉末集中管底
加入指定體積蒸餾水(如200μL),渦旋混勻5秒,靜置10-30分鐘至溶解
二、標(biāo)準(zhǔn)品稀釋步驟?
初始稀釋?
在S6管中加入500μL標(biāo)準(zhǔn)品樣本稀釋液
吸取溶解后的標(biāo)準(zhǔn)品母液500μL加入S6管,渦旋混勻5秒
倍比稀釋?
從S6管取500μL加入S5管,混勻
重復(fù)上述步驟至S1管,S0管僅含稀釋液(空白對(duì)照)
關(guān)鍵點(diǎn):每次稀釋需充分混勻,避免濃度誤差
特殊處理?
高濃度標(biāo)準(zhǔn)品(如血清樣本)需酸化處理:加鹽酸20μL混勻,孵育10分鐘后加氫氧化鈉20μL終止
三、稀釋后操作?
分裝與保存?
現(xiàn)配現(xiàn)用,避免反復(fù)凍融
分裝體積建議:50μL/孔(酶標(biāo)板使用)
質(zhì)量控制?
檢查各管液體混勻狀態(tài),避免沉淀
酸化樣本需20倍稀釋后使用
四、常見問題規(guī)避?
錯(cuò)誤示例?:未充分混勻?qū)е绿荻炔痪€性
解決方案?:使用排槍或自動(dòng)移液器降低操作誤差
(注:具體稀釋比例需根據(jù)試劑盒說明書調(diào)整,不同廠家標(biāo)準(zhǔn)品濃度可能差異較大)
注:以上資料僅供參考,具體產(chǎn)品信息請(qǐng)咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。
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