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熒光定量PCR 96孔板封膜操作指南
更新時(shí)間:2025-09-22瀏覽:41次

  熒光定量PCR 96孔板封膜操作指南

  熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)中,96孔板的封膜質(zhì)量直接影響熒光信號(hào)的檢測(cè)準(zhǔn)確性。以下是本生對(duì)PCR板的關(guān)鍵步驟與注意事項(xiàng)的詳解:

  1. 封膜前的準(zhǔn)備?

  選擇封板膜?:

  熒光定量PCR需使用?高透光性封板膜?(如透明自粘膜或光學(xué)熱封膜),確保熒光信號(hào)無(wú)衰減?。

  若需熱封,推薦溫度設(shè)置為100-110℃,時(shí)間3秒(避免過(guò)度加熱導(dǎo)致變形)?。

  清潔與防護(hù)?:

  戴手套操作,避免指紋污染膜面或孔板邊緣?。


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  2. 封膜操作步驟?

  貼膜?:

  從自封袋中取出單張封板膜,保持底襯面朝上,沿切線(xiàn)撕下底襯?。

  將粘性面一端對(duì)齊板子邊緣,緩慢貼合并拉平,避免褶皺或偏移?。

  壓膜?:

  手動(dòng)壓膜?:用邊緣光滑的卡片(如銀行卡)水平、垂直各壓兩次,確保孔間及邊緣密封?。

  儀器壓膜?:使用熱封儀(100-110℃)或冷封儀(恒定壓力)快速密封,避免氣泡或漏液?。

  檢查密封性?:

  觀察膜與板間是否緊密貼合,無(wú)液體殘留或褶皺?。

  離心(500×g,1分鐘)去除氣泡,提升密封效果?。

  3. 常見(jiàn)問(wèn)題與解決方案?

  封膜不嚴(yán)?:

  原因:壓力不足、溫度不當(dāng)或膜質(zhì)量差。

  解決:重新壓膜或更換高粘性膜?。

  熒光信號(hào)異常?:

  原因:膜透光性差或封膜后未離心。

  解決:使用光學(xué)級(jí)膜并嚴(yán)格離心?。

  4. 擴(kuò)展工具推薦?

  熱封儀?:適用于快速密封,適配多種膜類(lèi)型(如鋁箔膜、光學(xué)膜)?。

  離心機(jī)?:專(zhuān)用微孔板離心機(jī)可有效去除氣泡?。

  注意事項(xiàng)?:

  封膜后靜置10分鐘,增強(qiáng)粘合力?。

  避免反復(fù)開(kāi)蓋,防止水蒸氣影響熒光檢測(cè)?。


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